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凝胶色谱法

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凝胶色谱法

凝胶色谱法又叫凝胶色谱手艺,是六十年代初生长起来的一种快速而又简朴的星散剖析手艺,因为装备简朴、操纵轻易,不需要有机溶剂,对高分子物资有很高的星散结果。凝胶色谱法又称份子排阻色谱法。凝胶色谱法重要用于高聚物的相对份子质量分级剖析和相对份子质量散布测试。凭据星散的工具是水溶性的化合物照样有机溶剂可溶物,又可分为凝胶过滤色谱(GFC)和凝胶渗出色谱(GPC)。GFC一样平常用于星散水溶性的大分子,如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列,洗脱溶剂重要是火。凝胶渗出色谱法重要用于有机溶剂中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、散甲基丙烯酸甲酯等)相对份子质量散布剖析及星散,常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶,洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。凝胶色谱不只能够用于星散测定高聚物的相对份子质量和相对份子质量散布,同时凭据所用凝胶填料差别,可分离油溶性和水溶性物资,星散相对份子质量的局限从几百万到100以下。近年来,凝胶色谱也普遍用于星散小份子化合物。化学构造差别但相对份子质量邻近的物资,不可能经由过程凝胶色谱法到达完整的星散纯化的目标。凝胶色谱重要用于高聚物的相对份子质量分级剖析和相对勿子质量散布测试。现在曾经被生物化学、分子生物学、生物工程学、份子免疫学和医学等有关范畴普遍接纳,不只应用于科学实验研讨,并且曾经大规模天用于工业生产。

 

凝胶色谱法分类

凭据星散的工具是水溶性的化合物照样有机溶剂可溶物,又可分为凝胶过滤色谱(GFC)和凝胶渗出色谱(GPC)。

凝胶过滤色谱:

凝胶过滤色谱一样平常用于星散水溶性的大分子,如多糖类化合物。凝胶的代表是葡萄糖系列,洗脱溶剂重要是火。

凝胶渗出色谱:

凝胶渗出色谱法重要用于有机溶剂中可溶的高聚物(聚苯乙烯、聚氯已烯、聚乙烯、散甲基丙烯酸甲酯等)相对份子质量散布剖析及星散,常用的凝胶为交联聚苯乙烯凝胶,洗脱溶剂为四氢呋喃等有机溶剂。

凝胶色谱不只能够用于星散测定高聚物的相对份子质量和相对份子质量散布,同时凭据所用凝胶填料差别,可分离油溶性和水溶性物资,星散相对份子质量的局限从几百万到100以下。

近年来,凝胶色谱也普遍用于星散小份子化合物。化学构造差别但相对份子质量邻近的物资,不可能经由过程凝胶色谱法到达完整的星散纯化的目标。

 

凝胶色谱法道理

凝胶色谱法又称体积排阻色谱法,运用水溶液活动相的称为凝胶过滤色谱,运用有机溶剂活动相的称为凝胶渗出色谱。凝胶色谱的流动相是多孔物资,如多孔凝胶、交联聚苯乙烯、多孔玻璃及多孔硅胶等。试样是根据个中各组分份子巨细的差别而星散的。大于填料微孔的份子,因为不克不及进入填料微孔,而间接经由过程柱子,最早流出柱中,正在色谱图上最早泛起,小于填料微孔的组分份子,能够渗出到微孔中差别的深度,相对份子质量最小的组分,保存工夫最长。

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凝胶色谱法道理示意图

 

凝胶色谱取凝胶层析是不是一样?

基本上是同等的只是流动相存在差别。凝胶色谱法又称份子排阻色谱法。凝胶色谱重要用于高聚物的相对份子质量分级剖析和相对份子质量散布测试。

凝胶层析又称分子筛过滤、排阻层析,操纵前提对照温文,可正在相称广的温度局限下停止,而且对星散身分理化性子的保持有独到之处。

二者的共同点是皆不需要有机溶剂。凝胶色谱色谱一样平常用正在HPLC等剖析场所。而凝胶层析一样平常用正在制备的时刻。

 

凝胶渗出色谱取高效液相色谱有甚么区分?

凝胶色谱是高效液相色谱的一种。高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography\HPLC)又称“高压液相色谱”,是以液体为活动相,接纳高压输液体系,将具有差别极性的单一溶剂或差别比例的混淆溶剂、缓冲液等活动相泵入装有流动相的色谱柱,正在柱内各身分被星散后,进入检测器停止检测,从而实现对试样的剖析。分类有反相色谱法,正相色谱法,份子排阻色潽法等。凝胶色谱法又称份子排阻色谱法。凝胶色谱重要用于高聚物的相对份子质量分级剖析和相对份子质量散布测试。高效凝胶色谱法即用当代高效液相色谱法所运用的高压流路体系,将星散凝胶装填到金属色谱柱中构成关闭液相体系停止星散的色谱法。实际上凝胶色谱正在本质上就是液相色谱,只不过其星散道理是用凝胶对份子巨细的排阻,而不是通例液相色谱法常用的应用物资极性。

 

凝胶色谱法和电泳的区分是什么?

凝胶色谱法又称份子排阻色谱法。星散根据是目标物分子量的巨细。重要用于高聚物的相对份子质量分级剖析和相对份子质量散布测试。形象来讲更像是“分子筛”。大分子物资先流出,小份子物资后流出。-www.2138.com太阳集团

凝胶电泳的道理对照简朴。当一种份子被安排正在电场傍边时,它们便会以肯定的速度移向恰当的电极,这类电泳份子正在电场感化下的迁徙速度,叫做电泳的迁移率。它同电场的强度和电泳份子自己所照顾的净电荷数成反比。也就是说,电场强度越大、电泳份子所照顾的净电荷数目越多,其迁徙的速度也就越快,反之则较慢。因为正在电泳中运用了一种无回响反映活性的稳固的支撑介质,如琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺胶等,从而低落了对流活动,故电泳的迁移率又是同份子的摩擦系数成反比的。已知摩擦系数是份子的巨细、极性及介质粘度的函数,因而凭据份子巨细的差别、组成或外形的差别,和所带的净电荷的若干,便能够经由过程电泳将蛋白质或核酸份子混合物中的种种身分相互星散开来。形象来讲更像是“马拉松”。不外影响身分不单单是分子量了。

 

凝胶净化柱和凝胶色谱柱是一回事吗?

道理是一回事,都是排阻色谱。  然则前者是制备柱,对大量样品停止星散,柱子口径大,一样平常要有切割承样的尾接装配;后者是剖析柱,重要目标是对小量样品停止剖析,柱子直径小,一样平常另有柱温箱,对泵的稳定性要求下,必需接检测器。

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什么是凝胶?-大阳城集团娱乐网址

胶或溶液中的胶体粒子或高分子正在肯定条件下相互衔接,构成空间网状结构,构造闲暇中布满了作为疏散介质的液体(正在干凝胶中也能够是气体,干凝胶也称为气凝胶),如许一种特别的疏散系统称作凝胶。没有流动性。内部常含有大量液体。比方血凝胶、琼脂的含水量都可达99%以上。可分为弹性凝胶和脆性凝胶。弹性凝胶落空疏散介质后,体积明显缩小,而当从新吸取疏散介质时,体积又从新收缩,比方明胶等。脆性凝胶落空或从新吸取疏散介质时,外形和体积皆不改动,比方硅胶等。由溶液或溶胶构成凝胶的历程称为胶凝感化(gelation)。


凝胶色谱法的凝胶品种及性子

⑴Sephadex G交联葡聚糖的商品名为Sephadex,差别规格型号的葡聚糖用英文字母G示意,G前面的阿拉伯数为凝胶得火值的10倍。比方,G-25为每克凝胶收缩时吸水2.5克,一样G-200克每克干胶吸水20克。交联葡聚糖凝胶的品种有G-10,G-15,G-25,G-50,G-75,G-100,G-150,和G-200。因而,“G”反应,凝胶的交联水平,收缩水平及分部局限。

⑵Sephadex LH-20,是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶于火及亲脂溶剂,用于星散不溶于火的物资。 交联葡聚糖和琼脂糖都是多糖类物资,防备微生物的发展,正在凝胶层析中十分重要,常用的抑菌剂有:

⑴叠氨钠(NaN3)

正在凝胶层析中只要用0.02%叠氮钠已充足防备微生物的发展,叠氮钠易溶一水,正在20℃时约为40%;它不取蛋白质或碳水化合物相互作用,因而叠氮钠不影响抗体生机;不会改动蛋白质和碳水化合物的层析我特性。叠氮钠可滋扰荧光符号蛋白质。

⑵可乐酮[Cl3C-C(OH)(CH3)2]

正在凝胶层析中运用浓度为0.01-0.02%。正在微酸性溶液中它的杀菌结果最好,正在强碱性溶液中或温度高于60℃时易引发剖析而生效。

⑶乙基汞代巯基水杨酸钠

正在凝胶层析中作为抑菌剂运用浓度为0.05-0. 01%。正在微酸性溶液中最为有用。重金属离子可使乙基代巯基的物资联合,因此包罗疏基的蛋白质可正在不同程度上低落它的抑菌结果。

⑷苯基汞代盐

正在凝胶层析中运用浓度为0.001-0.01%。正在微碱性溶液中抑结果最好,长时间安排时可取卤素、硝酸根离子感化而发生沉淀;还原剂可引发此化合物剖析;含疏基的物资亦可低落或抑止它的抑菌作用。


2016-12-29 17:43:26  阅读次数:14546
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